Анализ ногтей на грибок. Как сдавать правильно Инвитро, Гемотест

Для выбора результативной схемы лечения грибка ногтей назначают лабораторный анализ насеротип и чувствительность возбудителя. С целью повышения терапевтической эффективности выполняют соскоб для последующего изучения органического материала методами микробиологической диагностики.

Общая характеристика

Применяют разные способы определения патоморфологических характеристик онихомикоза. Каждая форма инфекционного заболевания имеет специфические визуальные признаки. Поэтому лабораторная диагностики сводится к идентификации серологического типа возбудителя.

Анализ ногтей на грибок подолог или дерматолог назначает после первичного физикального осмотра, сбора анамнеза, изучения пораженных кератиновых пластин в лучах специальной люминесцентной лампы Вуда.

Последующая лабораторная диагностика направлена на дифференцирование онихомикоза с:

• Псориазом, поражающим кожный покров конечностей с роговыми придатками и имеющим визуально схожие симптоматические проявления.
• Красным плоским лишаем – хронически протекающей дерматологической патологией с образованием характерных папул.
• Асептической дистрофией ногтевых пластин с деформацией, изменением оттенка и структурного строения поверхности.
• Кератодермией – нарушениями процесса ороговения ногтевых пластин.
• Фолликулярным вегетирующим дискератозом – наследственной аномалией аутосомно-доминантного типа, обладающей схожими визуальными признаками с онихомикозом.
• Паронихией – воспалением околоногтевого валика с вторичным присоединением бактериальной или грибковой экзогенной инфекции, смешанной микрофлоры.
• Экземой – рецидивирующим заболеванием кожного покрова с вовлечением кератиновых придатков, проявляющимся полиморфной высыпкой, образованием узелковых очагов, интенсивной экссудацией в периоды обострения.
• Пахионией – врожденной либо приобретенной мезодермальной дисплазией, имеющей аналогичные грибковому поражению визуальные признаки.

Лабораторная диагностика онихомикоза не имеет противопоказаний. На результат исследования не влияют сопутствующие заболевания, общесоматическое состояние пациента. Спектр необходимых анализов профильный медицинской специалист определяет индвидуально на основании первичного осмотра.

Показания

Единственным поводом к назначению лабораторной диагностики считается подозрение на онихомикоз. Посетить подолога, миколога или дерматолога рекомендуется при первых проявлениях грибкового поражения кератиновых придатков кожного покрова. Показания к проведению лабораторного исследования соскоба ногтевых пластин определяются заметной и ощутимой симптоматикой.

Сдача органического материала для диагностического изучения требуется при:

• зудящих ощущениях;
• покраснении примыкающего к ногтевым пластинам эпидермиса;
• деформации кератиновых придатков;
• изменении цвета;
• образовании белых или желтых участков в пораженных грибковой инфекцией тканях;
• помутнение ногтей;
• развитие воспалительных реакций в патологической зоне или окружающем пространстве.

К перечню показаний для выполнения лабораторной процедуры относятся присоединение вторичной инфекции, нарушенная трофика кожного покрова. Анализы назначают при заметных изменениях формы, консистенции, плотности ногтевой пластины.

Очевидными показаниями к выполнению исследования считаются:

• гиперкератотические утолщения роговых придатков эпидермиса;
• повышенная ломкость;
• расслоение;
• крошение;
• дистрофические проявления;
• отделение пластины от ногтевого ложа, называемое онихолизисом;
• атрофическое состояние роговых волокон и подлежащей кожи.

Выступающие первоочередными поводами к проведению лабораторной диагностики визуальные признаки микотического поражения зависят от тяжести протекания заболевания, глубины внедрения и вирулентности возбудителя, индивидуальной сенсибилизации кожного покрова с кератиновыми придатками.

Расширенное обследование позволяет не только определить форму патологии, но и установить причину или благоприятствующие проникновению инфекции факторы.

Комплексная лабораторная диагностика выявляет:

• варикозное расширение вен;
• гипергидроз – повышенную выделительную активность потожировых желез;
• латентно протекающие эндокринные расстройства;
• скрытые иммунологические нарушения, увеличивающие вероятность инфицирования.

Анализ ногтей на грибок обнаруживает бессимптомные сосудистые и гематологические патологии, которые считаются провоцирующими онихомикоз факторами. Лабораторная диагностика определяет первичную локализацию инфекционного очага – поверхностную, дистальную, латеральную.

Виды анализов

Стандартным тестом считается соскоб покровного слоя кератиновой пластины с последующим микробиологическим исследованием. Ниже представлены применяемые методы дифференциальной диагностики онихомикоза.

Микроскопический тест

Исследование позволяет быстро определить биологическую принадлежность возбудителя. Фрагмент ногтевой пластины обрабатывают специальным реагентом или чувствительным окрашивающим веществом.

Биологический материал помещают на предметное стекло и изучают под электронным лабораторным микроскопом. На грибковую природу заболевания указывает наличие визуально заметных нитей мицелия, спор возбудителя, дрожжевых клеток.

Микроскопический анализ имеет преимущественно количественное значение, позволяет обобщенно определить серологический тип штамма – плесневой, дрожжеподобный. Такой тест предоставляет информацию о концентрации, биологической принадлежности частиц.

В полученном органическом материале под микроскопом заметны гифы, споровые элементы, конидии. Клинически малозначимая концентрация свидетельствует не о заболевании, а о бессимптомном носительстве.

Подготовка и условия проведения

В течение 48 ч. до забора органического материала нельзя принимать антимикотической препараты независимо от лекарственной формы и способа применения. Анализ сдают в специализированной медицинской лаборатории в условиях абсолютной стерильности.

Правила подготовки к забору материала для исследования микроскопическим методом:

• В течение 2 суток не использовать противогрибковые кремы и мази.
• На протяжении указанного периода времени не наносить декоративный лак для ногтей.
• За 6 ч. до сдачи анализа не употреблять крепкий кофе, сладкий чай, газированные напитки.
• На протяжении 4 ч. до проведения анализа не мочить и не мыть с мылом руки.

Необходимость изменения образа жизни и коррекция рациона не предусмотрены. При подозрении на онихомикоз настоятельно рекомендуется отказаться от посещения бассейна, солярия, пляжа.

Как проводят?

Анализ ногтей выполняют амбулаторно. Забор органического материала на грибок производят с использованием одноразового медицинского инструмента – специализированного скальпеля или шпателя.

Соскоб выполняют поверхностный или глубинный в зависимости от предписания направившего на анализ врача. Инструмент перед манипуляцией смачивают в минеральном масле.

Процедура поверхностного соскоба не доставляет дискомфорта и проходит практически безболезненно. По требованию пациента применяют анестезирующий гель или спрей на ледокаиновой основе. Глубинный соскоб предполагает энергичное воздействие.

Для проведения такой манипуляции требуется обезболивание. Кератиновую пластину скоблят до появления капли крови. Полученный материал помещают на предметное стекло, накрывают таким же материалом, подписывают и отправляют в лабораторию.

Значение результатов

В заключении указывают наличие микотической инфекции и обнаруженную концентрацию, но не биологическую принадлежность штамма. Для выяснения серологической разновидности и чувствительности к противогрибковым препаратам назначают дополнительную диагностику уточняющей направленности.

Может ли результат быть ложным?

Погрешность возможна только при пренебрежении представленными выше подготовительными мероприятиями. Ошибки возникают из-за нарушения правил стерильности. Микроскопическое исследование отличается высокой точностью результатов благодаря легкости визуальной идентификации мицелия.

Бактериальный посев

Применительно к грибковым инфекциям такой метод называют культуральным. Бакпосев дополнительно назначают при подозрении на вторичное присоединение микробной флоры. Выделение культуры путем помещения в питательную среду для масштабирования позволяет точно идентифицировать тип возбудителя.

После выяснения биологической и классовой принадлежности спровоцировавшего онихомикоз штамма определяют чувствительность к веществам фунгицидного спектра. Метод позволяет медицинскому специалисту назначить результативное лечение.

Культуральный тест:

• подтверждает грибковую природу заболевания ногтей;
• имеет дифференциальное значение;
• определяет точную концентрацию патогена;
• устанавливает смешанный состав микрофлоры.

Выгодное отличие теста от прямой микроскопии заключается в возможности точной идентификации штамма. Клиническая значимость анализа состоит в том, что эффективные против дрожжеподобных грибков лекарственные средства не подавляют дерматомицетов и наоборот.

Подготовка и условия проведения

Не отличаются от рекомендованных для прямого микроскопического исследования. За 2-4 недели до забора биологического материала следует прекратить прием любых системных препаратов с фунгицидными или антибиотическими свойствами. На применение наружных средств действует стандартное ограничение в 48 ч.

Как проводят?

Скальпелем или специальным лабораторным шпателем соскабливают поверхностный слой ногтевой пластины. Для изъятия фрагмента кератинового придатка эпидермиса иногда используют миниатюрные кусачки.

Материал помещают в пробирку, заполненную физиологически нейтральным раствором. Сосуд с органической тканью отправляют в лабораторию для культивирования патогенной микрофлоры.

Специалист готовит насыщенную витаминами, углеводами и аминокислотами питательную среду следующим образом:

1. Снимает с пробирки герметичную крышку.
2. Добавляет в сосуд стимулирующие рост патогенной популяции вещества.
3. Подогревает субстрат на паровой бане в течение 40-45 мин.
4. Плотно закрывает пробирку крышкой, слегка взбалтывая содержимое.
5. Выдерживает флакон на 15 мин. при комнатной температуре.
6. Переносит по истечении указанного промежутка времени в заполненную водой термостатическую камеру.
7. Поддерживает в устройстве температуру 45-50°С.

Анализ ногтей на грибок предусматривает проведение инкубационного периода. Длительность зависит от разновидности штамма. Дерматофиты и плесневые возбудители развивается на протяжении 2-3 недель.

Дрожжевая популяция растет быстрее – в течение 5-7 дней. Для определения чувствительности микрофлоры в субстрат добавляют лабораторные антибиотики (пенициллин, стрептомицин), которые препятствуют проникновению из атмосферного воздуха бактерий, подавляют рост содержащихся в исследуемом материале микробов.

Значение результатов

После окончания инкубационного периода состав и концентрацию микотической флоры оценивают с применением микроскопического оборудования или окрашивающих реагентов. Каждая разновидность грибков приобретает собственный оттенок под воздействием химического соединения.

Интерпретация результата – прерогатива профильного медицинского специалиста.

Данные исследования заносят в лабораторный бланк. Клиническое значение результатов теста заключается в возможности подбора эффективного лекарственного средства с учетом известной или выявленной лабораторным тестом чувствительности возбудителей.

Может ли результат быть ложным?

Для корректной интерпретации диагностических данных принимают во внимание серотип обнаруженных микотических штаммов. Нестерильные среды, к которым относятся ногтевые пластины, в норме содержат некоторые количество грибковых патогенов.

В процессе представляющего собой масштабирование популяции культурального посева отмечается рост концентрации микотических агентов, входящих в состав естественной микрофлоры. Позитивный тест используют не для постановки окончательного диагноза, а для проведения дополнительных обследований или повторного культурального анализа.

Наличие в изучаемом органическом материале кандиды, аспергилл, криптококков не может считаться точным свидетельством инвазивного онихомикоза. Такие микроорганизмы относятся к условно-патогенным штаммам и часто обнаруживаются в ногтевом соскобе здоровых людей.

ПЦР

Технология полимерной цепной реакции базируется на идентификации структуры ДНК микотических агентов. ПЦР-методику применяют для определения каждого серотипа возбудителя при поражении ногтевых пластин сложным смешанным микрофлорным составом. Тест имеет как качественную, так и количественную специфику.

Суть метода заключается в амплификации – множественном копировании участка генетической последовательности патогенов. Катализируемая лабораторными средствами ферментная реакция обеспечивает высокую точность исследования и получение достаточного для детального изучения материала.

Подготовка и условия проведения

Анализ ногтей на грибок методом ПЦР предусматривает соблюдение тех же правил, что и выполнение представленных выше исследований.

Желательно за 72 ч. до забора биологического материала избегать контакта кератиновых пластин и окружающего кожного покрова с:

• гигиеническими средствами;
• стиральным порошком;
• бытовыми химикатами;
• любыми реактивами промышленного предназначения.

Такие вещества способны исказить результаты анализа. Не рекомендуется в течение 7-10 дней обрезать или подпиливать ногти, наносить косметические кремы, декоративные лаки. Условия выполнения соскоба требуют осуществления процедуры в утренние часы натощак.

Как проводят?

Забор органического материала методом полимерной цепной реакции не отличается от аналогичного действия для исследования другим способом. Соскоб выполняют с поверхности пораженной онихомикозом ногтевой пластины.

Значение результатов

Позитивный тест свидетельствует о дерматофитии, нормотрофическом, атрофическом или гиперкератическом онихомикозе. ПЦР-диагностика позволяет установить точный состав патогенной микрофлоры, концентрацию возбудителя, но не форму заболевания. Последнюю определяют на основании клинической симптоматики.

Может ли результат быть ложным?

Полимерная цепная реакция – самый чувствительных и точный инструмент современной лабораторной диагностики. Ложные результаты – крайне редкое явление, связанное не с особенностями технологии, а с нарушением подготовительных правил. В 98-99% случаев результату ПЦР-теста можно доверять.

Стоимость

Окончательная цена зависит от типа лабораторного исследования, цены использованных расходных материалов. Посев дороже прямого микроскопического анализа. Качественная диагностики превосходит ценой количественную.

В таких крупных сетях, как «Гемотест» или «Инвитро», стоимость незначительно выше, чем в государственной поликлинике. Изучение ногтевого соскоба под микроскопом в среднем стоит 600 руб. Цена посева без определения чувствительности – 1000 руб.

Количественный ПЦР-анализ стоит около 300 руб. За качественное исследование многосоставной микрофлоры придется заплатить порядка 1500 руб. На окончательную стоимость влияет цена использованных реагентов.

Достоинства и недостатки

Каждое лабораторное исследование обладает собственным набором преимуществ.

Достоинства и недостатки применяемых для диагностики онихомикоза методов представлены в таблице:

Наименование теста	Преимущества	Недостатки
Микроскопический	Простата, быстрота получения результата.	Невозможность видовой идентификации, необходимость высокой концентрации возбудителя.
Культуральный посев	Высокая точность, выяснение чувствительности штаммов.	Специфические требования к транспортировке и обработке материала, длительное время проведения.
ПЦР	Возможность анализа многосоставной микрофлоры, приближенная к абсолютной достоверность теста, краткое время выполнения исследования, обнаружение латентной инфекции в малых концентрациях, одновременно количественное и качественное изучение ДНК-матриц.	Сравнительная дороговизна качественного анализа, необходимость проведения дополнительных исследований.

Представленные методы выявления микотического поражения ногтей считаются относительно достоверными и достаточными для выбора схемы терапии грибка. Окончательный диагноз профильный специалист устанавливает на основании результатов лабораторных анализов, наблюдаемой клинической картины.

Видео об анализе ногтей на грибок

Как правильно сдавать анализ на грибок ногтей: