Реакция Вассермана (RW). Что это за анализ, как сдавать, сколько делается

В 1906 г. иммунологом и микробиологом немецкого происхождения А. П. фон Вассерманом в сотрудничестве с А. Л. С. Нейссером был разработан тест для диагностики сифилиса. Это реакция, выявляющая наличие антител к возбудителю заболевания. В настоящее время классический подход исследования мало применяется, но все методы, направленные на выявление болезни, называются по имени его создателя.

Суть анализа

Сифилис – это венерическое заболевание инфекционного характера. Вызывается бледной трепонемой и отличается периодичным течением, поражением слизистых оболочек, кожных покровов, костно-мышечной системы и внутренних органов.

Оно имеет следующие пути передачи:

• Половой: является самым распространенным.
• Контакно-бытовой: таким способом заражаются дети от родителей, больных сифилисом.
• Трансфузионный: после переливания крови и ее составляющих от донора, имеющего в организме возбудителя заболевания.
• Трансплацентарный: передается плоду через плаценту от матери во время беременности.
• Профессиональный: инфицируется медицинский персонал при выполнении манипуляций с лицами, зараженными бледной трепонемой: хирурги, акушеры-гинекологи, стоматологи.

Возбудитель болезни остается активен в свежих выделениях заразившегося, таких как: слюна, моча и другие физиологические жидкости.

По форме сифилис делится на:

• Первичный. Возникает после заражения бледной трепонемой. Инкубационный период равен 6-8 недель от момента заражения. Характеризуется язвенным образованием на месте внедрения возбудителя, увеличением подчелюстных или паховых лимфоузлов. Положительная реакция диагностируется у 8 из 10 заболевших.
• Вторичный. Характерна бледная сыпь по всему телу, включая ладонную и подошвенную поверхность, симптомы интоксикации, свойственные респираторной инфекции. Выявляется почти в 100% случаях.
• Третичный. У 1/3 больных анализ RW дает отрицательный результат. У заболевшего поражается костный скелет, вызывая его деформацию, внутренние органы и нервная система.
• Бактерионосительство. Человек заражается бледной трепонемой, сильная иммунная реакция организма подавляет ее активное размножение, но не может полностью уничтожить инфекцию. В этом случае отсутствуют симптомы заболевания, но носитель опасен для людей, с которыми он контактирует.

Реакция Вассермана – это серологическое исследование, которое осуществляется экспресс-методом. Другое его название: анализ крови на RW. Исследование материала на сифилис основывается на выявлении специфических антител, которые вырабатываются иммунной системой организма человека в ответ на вторжение чужеродных антигенов в кровяное русло, вызывая их гибель.

Возбудитель заболевания содержит неспецифический белок кардиолипин. Медицинская промышленность получает его из сердец крупного рогатого скота и выпускает в готовом виде, прилагая инструкцию. При проведении исследования в пробирку, содержащую биологический материал (сыворотку), добавляется этот антиген, образуя прочные связи между антителами и белками врожденного иммунитета (комплементом) крови пациента. Затем состав подвергается гемолизу, после чего делается оценка результатов.

Анализ на RW указывает и фиксирует аутоиммунный процесс, который был запущен в организме человека бледной трепонемой.

Кровь на исследование берется только из венозного сосуда в количестве 5-10 мл. Манипуляция проводится в условиях процедурного кабинета поликлиники, диагностического центра или стационара.

Что может показать?

Анализ на RW основывается на реакции связывании комплемента. Ее цель: выявить антитела к возбудителю заболевания.

Исследование на сифилис помогает:

• Установить диагноз заболевания на его первой стадии.
• Определить длительность заражения.
• Выявить инфицирование при латентном (скрытом) течении болезни.
• Провести контроль лечения.
• Обследовать людей, имеющий контакт с больным человеком, на носительство возбудителя.

Показания к исследованию

Реакция Вассермана – это анализ крови, который проводится для диагностики и при обследованиях следующих групп лиц:

• Медицинские работники и персонал лечебных учреждений.
• Люди, связанные с продуктами питания (выращивание, продажа, переработка): работающие в дошкольных и школьных заведениях.
• Лица, которые по профессии имеют контакт с зараженным материалом.
• Доноры физиологических материалов организма.
• ВИЧ-инфицированные, наркоманы и ведущие асоциальный образ жизни.
• Пациенты, проходящие лечение в стационаре, а также те, кому назначена операция.
• С длительной лихорадкой неясного генеза.
• Обладатели санаторно-курортных путевок.
• Беременные женщины обследуются несколько раз на протяжении всего срока.
• Новорожденные дети для выявления врожденного поражения сифилисом.
• После полового акта со случайным знакомым без применения средств защиты (презерватив).
• При подозрении на заражение трепонемой: язвы в области половых органов, увеличение лимфоузлов, высыпания на коже.
• При прохождении ежегодной диспансеризации.
• Больным, проходящим лечение от сифилиса, для прослеживания динамики заболевания и эффективности лечения для своевременной его корректировки.

В период вынашивания ребенка

Беременным женщинам анализ крови на RW назначают 3-кратно:

1. При первом обращении по поводу беременности и постановке на учет.
2. На 13 неделе вынашивания.
3. При поступлении в роддом.

Женщине, которая переболела сифилисом, следует воздержаться от зачатия ребенка в течение 5 лет. Следует знать, что реакция Вассермана при вынашивании плода в 1,5 из 100 беременных бывает ложноположительной. Поэтому врач назначает повторный анализ. При подтверждении заражения трепонемой пациентке требуется лечение с целью уберечь плод от инфицирования и предотвращении внутриутробной гибели.

Сколько дней делают анализ?

Реакция Вассермана – это метод, относящийся к экспресс-диагностике на выявление возбудителя сифилиса. Проведение исследования классическим способом проводится в течение суток, по истечении которых врач получает данные анализа. Исключение составляют районные поликлиники. Из-за их удаленности от лабораторий кожвендиспансера анализ придется ждать до 2 недель (это связано с тем, что транспортировка материала и доставка результатов осуществляется по установленным дням).

Сейчас широко применяется метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Она является точным исследованием на выявление возбудителя заболевания. Ее достоверность достигает почти 100%. Результат известен через 5 час. после взятия биологического материала. Недостаток: высокая цена. Поэтому проведение анализа доступно частным клиникам.

Сколько действителен анализ?

Длительность достоверности результатов на реакцию RW не превышает 3 месяца. Чаще всего анализ проводят во время профилактического медосмотра 1 раз в год. Следует учесть, что во время инкубационного периода возбудителя невозможно выявить, так как в крови содержится очень маленькое количество антител. Положительный тест возможен через 4 недели после проникновения бледной трепонемы в организм человека.

Подготовка к анализу

Реакция Вассермана представляет собой один из лабораторных методов исследования и требует выполнения необходимых условий при подготовке к забору биоматериала. Это необходимо для устранения погрешностей, влияющих на результат.

Перед исследованием крови на RW следует учесть следующие факторы:

• Кровь берется в первой половине дня строго натощак или воздержание от приема еды должно быть в течение 6 ч, так как на достоверность влияют ферменты пищеварительной системы.
• За сутки до обследования нельзя употреблять: кофе и содержащие кофеин напитки, соки из фруктов, жирную пищу, алкоголь. Нужно воздерживаться от табака непосредственно перед взятием крови.
• Не рекомендуется 24 ч принимать лекарства, особенно содержащих в составе наперстянку, и антибиотики. О жизненно важных препаратах следует известить врача, чтобы он мог это учесть во время расшифровки результата.
• Накануне взятия анализа надо воздержаться от физических, эмоциональных нагрузок.
• Можно пить воду без газа или кипяченую.

Как проводится процедура

Для проверки человека на наличие в его организме возбудителя бледной трепонемы необходима кровь, взятая из вены.

Последовательность действий:

1. Во время забора материала пациент должен лежать или сидеть.
2. Его рука выше локтя перетягивается медицинским жгутом.
3. Место будущего прокола обрабатывается салфеткой, пропитанной 70% спиртом.
4. В венозный сосуд вводится игла, присоединенная к вакуумной пробирке. При помощи вакуума набирается 5-10 мл крови.
5. Ранка после инъекции прижимается спиртосодержащим материалом. Для предупреждения кровотечения рука на несколько минут сгибается в локтевом суставе, или медсестрой накладывается тугая фиксирующая повязка.
6. При взятии анализа у детей до года используется вены на голове ребенка.
7. Пробирку с кровяной массой отправляют в лабораторию для проведения проб на антитела к возбудителю. Хранение осуществляется в условиях холодильника не более 48 ч.

Техника проведения исследования:

1. Из взятой крови выделяется сыворотка посредством центрифугирования.
2. Ее делят на 3 порции, одна из которых является контрольной, а в 2 других вводится антиген кардиолипин. Затем пробирки помещается в термостат с температурой + 37°С на 1 ч, в течение которого в биологическом материале создаются прочные связи между антителами и введенным препаратом.
3. Состав подвергается гемолизу посредством химических веществ. Через 30-60 мин. проводят оценку: об отрицательном результате свидетельствует разрушение и гемолиз эритроцитов. Отсутствие или замедление реакции по сравнению с контрольным образцом указывает на возникновение реакции связывания антител с антигеном. По времени задержки оценивают стадию болезни.

   

Результаты анализа направляются врачу, который назначал обследование или выдаются на руки пациенту при самостоятельном обращении в медицинскую лабораторию.

Вероятность погрешности результатов

Погрешность достигает 10-20% случаев.

Это связано с:

• Наличием соматических заболеваний, влияющих на состав крови.
• Особенностями организма человека.
• Наличие латентного течения сифилиса, который сочетается с другой патологией.
• Пренебрежением пациентом рекомендаций перед забором материала.
• Недостаточной квалификацией лаборантов: ошибочные действия при взятии крови, ее хранении и транспортировке.
• Использование реагентов, срок годности которых истек.
• Неравномерность распределения антигена в пробирке, неиспользование контрольных образцов крови при исследовании материала.

На искажение результатов также могут влиять болезни инфекционного характера: лептоспироз, возвратный тиф, боррелиоз, вызванный укусом клеща, некоторые тропические заболевания стран латинской Америки, Африки (пинта, беджель). Их возбудители схожи по антигенам с бледной трепонемой. При исследовании дают ложноположительную реакцию.

Расшифровка

Реакция Вассермана – это методика обнаружения бледной трепонемы в организме человека, основанная на ответе его иммунной системы на вторжение белка, схожего по составу с антигеном возбудителя сифилиса. Негативный результат (отрицательный) говорит об отсутствии бактерии в крови пациента и обозначается знаком «-» (минус). Положительный записывается со знаком «+» (плюс).

Положительная реакция Вассермана

Положительный RW показывает, что в кровяной сыворотке человека обнаружили кардиолипин − антиген трепонемы.

Это возможно при следующих состояниях:

• Пациент болен сифилисом.
• Тест выдал ложноположительную реакцию.
• При антифосфолипидном синдроме.
• В течение года после проведенного лечения сифилиса.

В этом случае всегда назначается повторное исследование на выявление антител к возбудителю и другие методы диагностики.

В зависимости от времени задержки реакции гемолиза результат исследования интерпретируется следующим образом:

Количество «+»	Реакция	Гемолиз эритроцитов по времени	Количество возбудителя
++++	Резко положительная	Не было признаков	Очень большое
+++	Положительная	Значительная задержка	Значительное
++	Слабоположительная	Частичная	Небольшое
+	Сомнительная	Незначительная	Очень мало или результат ошибочен

Пациента снимают с учета после трех последовательно сделанных исследований на наличие возбудителя, анализа спиномозговой жидкости и обследования у врачей: офтальмолога, невролога и отоларинголога.

Ложноположительная реакция Вассермана

Ложноположительный RW может быть спровоцирован нарушением работы эндокринной и иммунной систем, наличием тяжелых соматических заболеваний.

Проявляется при следующих инфекциях и состояниях:

• Туберкулез бронхолегочной системы.
• Заболевания соединительных тканей.
• Инфекционные болезни: ветряная оспа, мононуклеоз, паротит, корь.
• В период реконвалесценции и после вакцинирования.
• Онкология: лимфома, миелома.
• Гепатиты, цирроз печени, ВИЧ-инфекция.
• Сахарный диабет.
• Ревматических и аутоиммунных заболеваниях: системной красной волчанке, проказе.
• После недавно перенесенного инсульта, инфаркта.
• При отравлениях и интоксикации.
• При заболевании бруцеллезом.
• У женщин во время менструации, беременности, в течение 2 недель до и после родов.
• У младенцев в первые 10 дней от момента рождения.
• После приема жирной пищи, алкогольных напитков, курения.

Также на погрешность результата влияет пожилой возраст пациента (80+), частота переливания компонентов крови при гемофилии, лейкозе и наркотические вещества, введенные инъекционно.

При ложноположительном результате до «++» обязательно назначается повторный анализ крови пациента. Его проводят через несколько недель или применяют другие способы диагностики, основанные на современных лабораторных средствах.

Отрицательная реакция Вассермана

Характеризует здорового человека (это касается только венерического заболевания и не относится к соматическим болезням), который не подвергался инфицированию сифилисом.

Следует отметить, что в первые 3 недели с момента заражения бледной трепонемой реакция Вассермана показывает отрицательный результат. Это объясняется небольшим количеством антител в крови заболевшего. Через 1,5 месяца положительный тест показывает у 25% больных. Только в разгар болезни достоверность приближается к 80-90%.

Ложноотрицательный RW возможен в период серо негативного окна на любой стадии заболевания, а также при взятии капиллярной крови из пальца.

Какие анализы пациенты сдают дополнительно?

Критерием правильной постановки диагноза сифилиса является выделение возбудителя болезни или наличие антител к нему.

К прямым методам исследования относятся:

• ТМП – темнопольная микроскопия. Наиболее достоверный диагностический поход. Материалом служит отделяемое из язвы, эрозии, содержимое, взятое при пункции лимфоузла. В темном поле под микроскопом бледная трепонема вид в виде спирали. Дифференциация от других похожих возбудителей производится по морфологии бактерии и ее характерным движениям. На основании этого ставится диагноз.
• ПИФ – прямая иммунофлюоресценция. Применяется для исследования выделений из области поражения слизистой рта, прямой кишки, материала, полученного при аутопсии, биопсии. Техника анализа заключается в помещении образцов на предметное стекло, при люминесцентной микроскопии врачом-лаборантом наблюдается свечение ярко-зеленым светом.
• ПЦР – полимеразная цепная реакция. Технология основана на обнаружении ДНК возбудителя. В качестве источника берется спиномозговая, тканевая, амниотическая, семенная жидкость, кровь.

Также используются такие реакции и обследования, как:

• РИФ – иммунофлюоресценции.
• РПГА – пассивной гемагглютинации.
• РИБТ – иммобилизации бледных трепонем.
• ИФА – иммуноферментный анализ.
• Иммуноблотинг.

В XX в. реакция Вассермана была единственным способом, позволявшим провести диагностику и контроль лечения у больных сифилисом. Это недорогой и быстрый анализ, имеющий высокий процент точности. В настоящее время разработаны новые технологии исследования, которые дают меньше недостоверных результатов. Но некоторые лаборатории до сих пор применяют эту технологию из-за ее доступности.

Видео о реакции Вассермана

Анализ крови RW: